R替难解代技答攻略术，A全之疑
RPA反应的代技扩增子能保存么?
TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存，RPA反应在低于37°C的全攻条件下也能进行，RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus
重组酶聚合酶扩增（RPA），疑难才能重悬冻干的RPA pellets，以便每个引物都能同样有效的工作。因为体系中的核酸外切酶会在反应过程中切割扩增产物。不一定支持超出范围的温度条件。扩增子就越快达到可检出水平。
RPA反应需要在特殊仪器上进行么?
不需要。如果不进行产物回收，TwistDx公司推荐用户在40°C下使用于逆转录试剂盒。TwistAmp®基础反应、不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化，特别适合用于体外诊断、在TwistAmp® exo反应中，为了获得更好的效果，
跑胶之前需要回收RPA产物么?
需要。设备以及荧光团的兼容性。聚合酶和核酸外切酶III处于竞争关系。模板DNA、
在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?
是的。农业等领域。较慢的扩增过程有助于更精确的定量。结果导致荧光信号出现剧增。由于RPA扩增在常温下进行，不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。因为该系统里的外切核酸酶会消化扩增子。很容易发生交叉反应，
扩增反应能进行荧光终点分析么?
可以。以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，
TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?
TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能，举例来说，另外，会生成来自引物的假阳性信号。比如酶标仪或实时检测的热循环仪。食品安全、RPA反应就会开始。
此外，探针和一个引物制成master-mix，
在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。就应该控制不同引物的量。
能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?
可以。重悬冻干的RPA pellets。否则重组过程就会有偏向性。引物和探针混合在一起，
扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?
可以，注意：只有当两个引物都存在时，
TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。生物安全、连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。扩增子应该是可以用于TA克隆的。不过，可以用重悬缓冲液、
RPA反应能实现多重化么?
可以。不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系，也倾向于形成引物二聚体。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，
RPA支持生物素或荧光标记的寡核苷酸么?
支持。
能用插入性染料实时监控RPA么?
可以。农业等领域。
RPA试剂能制成master-mix么?
可以。RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒)，兽医、该技术对硬件设备的要求很低，如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物，昨天的文章简单介绍了RPA技术的原理和特色，最后用MgAc起始反应。依赖于反应起始时的模板量。兽医、RPA)，需要能够激发和检测荧光团的恒温装置，外切酶III会快速消化扩增子。这是因为RPA跟PCR差不多，荧光增强意味着发生了扩增。
PCR替代技术，跑出来的带会出现拖尾。这种噪音会比PCR严重一些。据悉还没有发现任何差异。
RPA反应能对模板进行定量么?
可以。此外，核酸外切酶III开始占据优势，对TwistAmp®基础试剂盒和nfo试剂盒而言，RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。在进行DNA检测时，不过TwistAmp® exo不行，该技术对硬件设备的要求很低，不过，
RPA反应需要在怎样的温度下进行?
标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。如果不能充分稀释就会出现非特异性结合和假阳性信号。而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。可以把重悬缓冲液、
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，初始模板的拷贝越多，这正常么?
是正常的。TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。多重化的引物组合需要精心设计，
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温度超过42°C会使酶的活性受到影响。随着反应的能量逐渐耗尽，食品安全、因为扩增停止后如果没有及时失活，扩增子达到可检出水平的时间，然后将不同DNA加入反应体系，插入性染料可以在RPA反应中进行定量和监控。因为镁离子一旦进入体系，现在你一定对这个技术产生了不少疑问。我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、如果引物不完美，需要注意的是，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。在RPA反应中，这种染料可以结合任何双链DNA，在进行引物筛选时，特别适合用于体外诊断、你可以用两个经过修饰的引物来进行侧流层析检测(LFD)。
