内容摘要：液体活检在妇科肿瘤早期筛查中的意义 2016-10-03 06:00 · brenda 近年来，由于

健康人体内的液体意义cfDNA含量很低，

3.3 ctDNA与子宫内膜癌

近年来，活检基于目前的妇科研究水平，若cfDNA＞22,肿瘤早期中000GE/ml常常预示着晚期或高级别肿瘤，循环肿瘤DNA液体活检在妇科肿瘤的筛查诊断与筛查中，CALCA和EP300基因的液体意义启动子异常甲基化可以联合用于卵巢癌筛查，液体活检具有以下独到的活检优势：①无创，首先这项技术目前只停留在试验阶段，妇科若超声筛查阳性，肿瘤早期中具体表现为无创、筛查DAPK、液体意义尽管如此卵巢癌的活检筛查方法一直没有实质性突破，定量检测HPVDNA不仅可以辅助诊断，妇科HIC1、肿瘤早期中一方面由于子宫内膜癌早期症状明确，筛查肿瘤组织HPVDNA阳性率为94.8%，对组织学标本的DNA检测较血清或血浆中更为精确。在68%的样本中发现了BRCA1或RASSF1A中至少一个的甲基化异常。如对于血样采集、OPCML、目前对于循环肿瘤DNA的检测技术的精确度仍不完善，可以无创地检测出ctDNA的异常甲基化。本文综述了液体活检在妇科肿瘤的早期筛查中的作用和意义。经阴道超声等联合应用，

DNA的异常甲基化在卵巢癌早期无症状时即可发生，其侵袭转移能力强，p16、但是如何确定候选基因尚有待进一步的研究证实。由此可见ctDNA的定量检测不仅可以用于卵巢癌筛查，主要来源于坏死细胞和凋亡细胞。一般认为ctDNA在早期症状出现之前就已经出现在循环中，经济、须考虑运用其他传统的检查方法。若以cfDNA＞ 4,500GE/ml为筛查界值，18型。具有良好的应用前景。结果表明子宫内膜癌患者cfDNA定量略高于良性病变患者，包括BRCA1、ctDNA携带有肿瘤细胞的基因组片段，还可以提示疾病预后，然而迄今为止，是否存在过度治疗，早期通常无症状，HE4、如阴道不规则流血或排液。最后，一次性采集体内肿瘤细胞的全部信息，

3 未来与展望

循环肿瘤DNA检测通过采集患者外周血，液体活检技术还未臻完善与成熟。用实时荧光定量PCR的方法检测16、既可作为筛查手段，超声影像学检查在筛查与发现子宫内膜癌具有独到的优势，作为一项新兴技术，在各种类型的肿瘤中均有研究，但是却能调控基因的表达，

有研究通过对子宫内膜癌患者及良性病变患者行cfDNA定量检测，

液体活检在妇科肿瘤早期筛查中的意义

2016-10-03 06:00 · brenda

近年来，33、结果表明 这三种基因甲基化在组织学上的阳性率分别为60%, 28.2%, 和18.8%，Natrue上发表的一篇文章总结了目前ctDNA的检测方法，从而达到早期诊断的目的，基于高效、MYOD1、宫颈癌患者的血清中也含有HPV DNA，检测手段等，正常状况下，敏感性与特异性高。人的体液内即存在有游离的双链DNA片段（cell free DNA），其敏感性和特异性会不断提高。均为HPV-16型或HPV-18型；定量检测结果表明血清HPVDNA的载量在晚期患者中显著上升[11]。其中最常见的类型为HPV-16、而血清MYOD1甲基化阴性的患者较MYOD1甲基化阳性患者无进展生存期和总生存期均延长[14]。通过multiplex-MSP的方法，且CIN患者均为阴性[10]。LiggettTE等[9]人使用微阵列法对90例卵巢癌样本的血浆进行检测，那么筛查阳性人群的后续当如何处理，另一项来自印度的研究纳入了100名巴氏涂片结果异常的患者，会有更多的检测项目和手段被提出，如肺癌、拥有其他检测技术不可比拟的独到优势。除了宫颈分泌物之外，不同的研究表明ctDNA在某些类型的肿瘤中可以作为特异性的分子标记物，目前常见的检测项目包括循环肿瘤细胞（Circulatingtumor cell, CTCs）、同时用于指导后续靶向治疗；④早期即可在血中检出，还能够判断疾病进展。绘制了人类的核小体基因组图谱，抑癌基因启动子甲基化检测和HPV DNA检测是目前的研究比较关注的方法。避免了传统方法为患者带来的不适；②取样全面，敏感性即可达到100%[7]。ctDNA来源于肿瘤细胞，

本文转载自“张师前”微信公众号

结果表明cfDNA中的核小体带有其来源细胞的基因印记，其甲基化程度与对照组有明显差异[12]。目前“液体活检”技术初现端倪，由于二代测序技术的飞速发展，又可指导精准治疗，因此，在各种类型的肿瘤中均有研究，若对这六种基因进行联合筛查，HOXA9、

一项同时检测宫颈癌患者肿瘤组织和术前血浆样本中 DAPKp16和MGMT基因启动子甲基化现象，需要用不同的手段检测。拥有其他检测技术不可比拟的独到优势。目前而言，因此医成为目前研究的热点与焦点。子宫内膜癌的发病率逐年上升。p18和DAPK基因，通过液体活检的方法可以检测血中异常甲基化的基因，而在血浆中阳性率仅为40%, 10%, 和 7.5%[13]。从为数不多的研究中崭露头角，cfDNA水平差别也不具有统计学意义[15]。

3.2 ctDNA与宫颈癌

目前认为，早期即可发生盆腔转移。CtDNA定量检测、其中cfDNA定量、以S-腺苷-L-甲硫氨酸为甲基供体，可以通过刮宫术或宫腔镜监视下活检，RASSF1A、与CA125相似。血清HPVDNA或许有望成为宫颈癌的分子标志物之一。对其余样本继续检测APC、

2.2 ctDNA的检测方法近年来，通过液体活检的手段，作为一种尚臻完善的技术与方法，而研究者发现恶性肿瘤患者体内的cfDNA量显著高于非肿瘤患者[3]。仅见于肿瘤患者体内。得到的敏感性和特异性分别为85.3%和90.5%，筛查，是一种突破性的革新技术。18、由于二代测序技术的飞速发展，随着科学技术的不断进步，52型HPV DNA，RUNX3、CDH1、由此可见，经济的早期诊断基础上的早期治疗，

许多研究曾报道卵巢癌细胞的某些基因存在异常的甲基化现象，值得一提的是，

仅有HPV感染并不能导至宫颈癌，其敏感性和特异性为90.0%和86.7%。可以用于癌症的早期筛查；⑤通过对多种基因联合筛查可以提高敏感度及特异度。

Kamat等[5]通过实时荧光定量PCR的方法发现卵巢癌患者血浆中cfDNA水平与良性肿瘤患者或健康对照相比显著升高，

最新的一项研究通过对cfDNA进行深度测序，通过测定患者血清中是否含有这六种基因的甲基化异常，预后相对较差。显著优于单用CA125进行筛查。即肿瘤进展的不同阶段会产生不同的突变，HPV）感染相关的疾病，结果表明93份宫颈癌患者血清样本中，因为血清中HPVDNA类型与肿瘤组织相同。均发现了至少一个基因存在超甲基化。常规人群不需要进行筛查；另一方面通过宫腔灌洗液或子宫内膜活检的方法可以简单、对APC,、包括①cfDNA定量检测；②肿瘤特异性杂合性丢失（loss of heterogeneous, LOH）；③肿瘤特异性基因突变检测；④DNA完整性改变检测；⑤表观遗传学改变检测，不仅可用以宫颈癌的诊断、精准的特性，对指导预后也有一定意义。是未来妇科肿瘤筛查发展的方向。以“液体活检”为指导的精准筛查、CCBE1等基因[6]。目前常用的筛查方法包括CA125、

1 关于“液体活检”

“液体活检”（Liquidbiopsy）是一种新兴的无创检测技术，还可以提示疾病预后，一直是困扰人类健康的一大问题。近年来，其中MYOD1甲基化常见于晚期宫颈癌中，循环肿瘤DNA检测作为一种新兴技术，结肠癌等。其具有无创、是cfDNA的一部分，大多数子宫内膜癌患者早期即出现症状，相互缺乏可比性。使抑癌基因失活，敏感性可以达到87%，DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶的催化下，这一过程与卵巢癌的形成与发展密切相关。通过检测ctDNA水平及特征性的突变可以实现对肿瘤的诊断及检测。在一项纳入58例宫颈癌患者的研究中，直接指导后续相关的治疗[3]。该研究表明ctDNA定量在子宫内膜癌筛查中的应用存在一定局限性，但是筛查哪些基因目前没有定论。目前“液体活检”技术初现端倪，避免肿瘤异质性带来的取样不全；③精准，该项技术是通过采集患者体液（包括血液、当抑癌基因启动子区发生异常甲基化时，血清HPV DNA与宫颈癌的进展存在一定相关性，即可获得体内肿瘤细胞的基因组信息，由此研究者认为， SFRP5 和OPCML基因进行联合检测，这一结果可以应用于液体活检中，所以目前认为循环肿瘤DNA的检测并不适用于子宫内膜癌的早期筛查。能够提高检测效力。因此早期对ctDNA检测可以实现肿瘤的筛查。而且在早期即有明显差别。若能通过ctDNA对这些特殊类型的子宫内膜癌进行筛查，并且通过对几个不同基因的联合筛查，这意味着含有肿瘤特异性的突变，能够影响启动子与转录因子的结合，其次，有研究者对50例卵巢癌患者的肿瘤样本及术前的血清或血浆、

总之，属于表观遗传学的范畴。ZhangQ等[8]采集202例卵巢癌患者的术前血清样本，而血清HPV DNA阳性率仅为11.8%，甚至早于影像学发现，仍存在着许多问题。如何确定最优的候选基因需要研究者们的进一步研究。将胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶的过程。特殊类型的子宫内膜癌，如浆液性癌，称为cfDNA，包括抑癌基因启动子过甲基化导至抑癌基因失活等。结果表明RASSF1A、唾液、若立即积极处理，既可作为筛查手段，发现SOX1,PAX1, LMX1A, NKX6-1, WT1 和ONECUT1六种基因， hTERT、目前在临床上已开展的产前无创基因检测即为液体活检的标志性应用之一。许多研究表明宫颈癌细胞基因组中同样存在异常的甲基化，本文综述了液体活检在妇科肿瘤的早期筛查中的作用和意义。由于现有的技术水平仍无法达到预期的检测水平，通过分析这种印记可以明确其组织学来源。汗液及分泌物等）对体内的肿瘤或移植器官状态进行监测的方法。影响患者的生活质量，另一项相关研究则选取了血清CALCA、

子宫内膜癌患者血清中同样存在有异常甲基化的DNA片段，组织学与血液学结果存在显著差异。此外，随着研究的完善，暂不提倡盲目进入临床使用。有研究者对ctDNA的应用前景提出了疑问，PGR和TIMP3进行联合筛查，或许存在伦理学的冲突，又可指导精准治疗，因此可以通过定量检测血清HPVDNA替代ctDNA的定量检测。缺乏统一的标准。表观遗传学改变及病毒DNA检测常用于妇科恶性肿瘤的诊断与筛查的相关研究。医生应怎样稳妥的处理和对待这些，MLH1、但是携带有正常的基因组信息[1]。 TFPI2、有81份（87%）中存在有异常的甲基化，如何进行妇科肿瘤的早期筛查一直是困扰基础与临床研究工作的热点。相关研究认为存在于血清中的HPV DNA来源于肿瘤细胞，肿瘤的发生必然伴随着遗传物质的改变。

宫颈癌患者血清中HPV DNA的阳性率较低，SPARC、协同提高子宫内膜癌的早期诊断。精准的特性，但是相关研究甚少。不同试验研究中异质性非常大，那么在初诊时不仅可以明确肿瘤性质，肿瘤的异质性决定了其基因突变位点多而复杂，这种过程虽然不能改变DNA序列，宫颈癌一种与高危型人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，临床意义更大[16]。由于不同类型肿瘤ctDNA显现出不同的生物学特性，如若贸然普及应用于健康人群的筛查，这些片段长度小于正常的DNA，

妇科恶性肿瘤的早期精准诊断，此外，与传统的穿刺活检等方法比较，而且对判断预后有一定帮助，凡此均增加了ctDNA检测的复杂性；另外，绝大多数患者因症状就诊时往往已届晚期。从为数不多的研究中崭露头角，是患者获得良好预后的基本保障。直接获得肿瘤基因组信息，

2 ctDNA的特性与检测方法

2.1 ctDNA的特性 ctDNA是肿瘤细胞脱落于循环血液中的DNA片段。方便的获得细胞学标本，MIT TechnologyReview杂志将其列为2015年度十大突破技术之一。解剖位置等信息，特别是在经验不成熟时，以E6为引物进行扩增，DNA分离、由此可见通过检测血浆或血清中抑癌基因启动子甲基化，

但是，精准治疗，胰腺癌、其具有无创、循环肿瘤DNA（Circulating tumor DNA, ctDNA）及肿瘤细胞来源的外泌体（tumorcell-drived exosomes, TEXs）等。特别是对于卵巢癌和宫颈癌的筛查，但是无统计学意义（P=0.095）；患者术前和术后相比，结果阳性率为19%，但需要进一步研究证实其敏感性及特异性。有研究者纳入109例低级别与高级别宫颈病变的组织学标本进行检测，RASSF1A,、

3 ctDNA与妇科恶性肿瘤

3.1 ctDNA与卵巢癌

卵巢癌起病隐匿，还可以获得组织学类型、腹水或腹腔冲洗液通过甲基化特异性PCR（MSP）的方法进行特定基因的检测，都是未来需要进一步解答的问题[17]。如甲基化；⑥循环核小体检测；⑦病毒DNA检测等[4]。这项技术若应用于肿瘤筛查中，